### 抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）

#### 1. 包被步骤：

1）使用包被缓冲液调配1-10μg/ml的抗原溶液（现配现用）。

2）向高结合力ELISA板（货号80112）每孔加入100μl的抗原溶液，覆盖封板膜，并于室温下轻轻摇动孵育2-6小时，或在4℃下过夜。

3）废弃溶液后，用洗涤缓冲液清洗板子2次。

#### 2. 封闭步骤：

1）使用封闭缓冲液母液调配工作液，并每孔加入300μl，室温轻轻摇动孵育2-6小时或4℃过夜。

2）吸弃封闭液，并在吸水纸上拍干，板子可立即使用，或密封保存于4℃备用。

#### 3. 抗体效价检测：

1）使用抗体稀释液对免疫前/免疫后血清进行梯度稀释（1:100至1:100,000），每孔加入100μl。覆盖封板膜，室温轻轻摇动孵育30分钟。

2）废弃液体后，用洗涤缓冲液洗板5次（每次200-300μl，洗涤不充分可能导致高背景）。

3）配制HRP标记的抗兔二抗（1:5,000-1:20,000）使用抗体稀释液，每孔加入100μl（稀释不当可能导致显色过弱或背景过高）。

4）覆盖封板膜，室温轻轻摇动孵育30分钟。

5）废弃液体后，洗板5次并拍干。

6）每孔加入100μl现成的TMB底物溶液。

7）覆盖封板膜，室温轻轻摇动孵育至阳性孔出现蓝色（最长15分钟）。

8）每孔加入100μl终止液，蓝色变为黄色。

9）在450nm波长下读取吸光度。

**注意事项：**

1）本ELISA流程适用于针对纯化抗原（蛋白质或多肽）产生的抗体的定性检测，不适用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。

2）本流程默认一抗来自兔源，若使用其他宿主动物需选择相应的二抗。

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品牌货号及名称如下：
- 4ADI80150 小鼠血清抗体检测试剂盒 Mouse Primary Antibody (A+G+M) detection and titration ELISA kit, Qualitative (sufficient for 500-1000 tests)
- 4ADI80155 大鼠血清抗体检测试剂盒 Rat Primary Antibody (A+G+M) detection and titration ELISA kit, Qualitative (sufficient for 500-1000 tests)
- 4ADI80160 兔血清抗体检测试剂盒 Rabbit Primary Antibody (A+G+M) detection and titration ELISA kit, Qualitative (sufficient for 500-1000 tests)
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